Molekiolan'ny biolojika fikarohana sy ny fomba fampiasana

Molekiolan'ny biolojika fikarohana fomba anjara lehibe eo amin'ny fitsaboana maoderina, Nanoritra ny siansa, ary ny biolojia. Noho ny fandrosoana eo amin'ny fianarana ny ADN sy ARN, ilay olona dia afaka hijery ny genome ny taova causative mamaritra ny mpandraharaha, mba hamantatra ny irina nucleic asidra ao amin'ny mifangaro ny amine, sns

Molekiolan'ny-niteraka fomba. Inona moa izany?

Back an-70-80s ny mpahay siansa no voalohany decipher ny genome olombelona. Izany zava-nitranga dia nanome tosika ho amin'ny fampandrosoana ny fikarohana ara-pananahana sy ny molekiola ao amin'ny zavamananaina. Fianarana ny fananan ny ADN sy ARN dia midika fa efa azo atao ny mampiasa ireo nucleic amine mba ho aretina aretina, Gene fianarana.

Fanomanana ny ADN sy ARN

Molekiolan'ny biolojika fizahana aretina fomba mitaky manomboka ara-nofo: Matetika izany nucleic asidra. Misy fomba maro ny mifidy ireo zavatra avy any amin'ny sela ny zavamananaina. Tsirairay dia manana ny tombony sy ny fatiantoka, ary tokony hojerena rehefa mifidy ny fomba mitokana nucleic amine amin'ny endrika madio.

1. Fanomanana ny ADN avy Marmur. Ny fomba mifototra amin'ny fitsaboana ny fifangaroan'ny toaka akora, precipitates madio vokatry ADN. Ny lafy ratsiny io no fomba manimba tsikelikely ny fampiasana ny akora, phenol sy chloroform.

2. Isolation ny ADN eo amin'ny Boom. Ny tena fananana izay ampiasaina eto - dia guanidine thiocyanate (GuSCN). Tsy mampandroso ny deposition ny acide asidra amin'ny substrates manokana, izay mety ho taty aoriana nangonin'ny alalan'ny manokana buffer. Na izany aza GuSCN - dia inhibitor ny TCP, ary na dia ampahany kely izay napetraka ao amin'ny ADN mahazo dia afaka hisy fiantraikany ny Mazava ho azy ny rojo polymerase fanehoan-kevitra, izay zava-dehibe, rehefa niara-niasa tamin'ny nucleic amine.

3. Precipitation ny loto. Ny fomba mitovy amin'ny teo aloha ireo amin 'izany ny molekiola ny tenany aza tsy nametraka dehoksiribonukleinovoy asidra sy ny loto. Mba hanaovana izany, dia ampiasao ny Ion exchangers. Ny tombon-dahiny dia tsy azo hadinoina zavatra rehetra.

4. Lamesa projection. Io fomba ampiasaina amin'ny toe-javatra rehefa tsy mila fanazavana marina momba ny firafitry ny ADN, sy ny tokony haka antontan'isa. Ny antony dia ny nucleic rafitra asidra azo simba, rehefa manazava ny vovon-tsavony, indrindra alkalies.

Fanasokajiana ny fikarohana fomba

Molekiolan'ny-biolojika rehetra fomba fikarohana dia zaraina ho vondrona telo lehibe:

1. Amplification (mampiasa plurality ny anzima). Tafiditra amin'izany ny PCR - polymerase rojo fanehoan-kevitra, izay tena ilaina eo amin'ny maro ny fomba fizahana aretina.

2. Neamplifikatsionnye. Io vondrona ny fomba dia mifandray mivantana amin'ny asa nucleic mixtures asidra. Ohatra ireo 3 karazany mamono, amin'ny situ hybridization, sns

3. Fomba miorina amin'ny fankatoavana ny tsato-kazo famantarana avy amin'ny fangadiana molekiola, izay mamehy ny ADN na ARN manokana fangadiana. Ohatra - hybridization rafitra Hybride fisamborana System vahaolana (hc2).

Anzima izay dia azo ampiasaina amin'ny fomba fikarohana molekiolan'ny biolojika

Maro ny molekiolan'ny fizahana aretina teknika mahakasika ny fampiasana ny anzima malalaka isan-karazany. Ireto ambany ireto dia ampiasaina matetika indrindra:

1. fameperana anzima - "nanapaka" ny ADN ho any amin'ny faritra ilaina.

2. DNA polymerase - Mamehy roa-tafahitsoka acide asidra molekiola.

3. Reverse transcriptase (hanova transcriptase) - nampiasaina mba synthesize ADN avy amin'ny ARN template.

4. ADN ligase - no tompon'andraikitra amin'ny fananganana ny phosphodiester fatorana eo nucleotides.

5. exonuclease - manala nucleotides avy any amin'ny faran'ny ampahany amin'ny acide asidra molekiola.

PCR - ny fototra fomba ADN amplification

Polymerase rojo fanehoan-kevitra (PCR) no be mpampiasa ankehitriny molekiola ao amin'ny zavamananaina. Izany fomba, izay iray ADN azo nahazo maro ny dika mitovy (manamafy molekiola).

Ny tena asa ny PCR:

- aretina ny aretina;

- Fanamboarana DNA fizarana, Gene.

Mba hanatanteraka ny polymerase rojo fanehoan-kevitra dia mitaky ireto singa manaraka ireto: voalohany ADN, dia thermostable ADN polymerase (Taq na Pfu), deoxyribonucleotide phosphates (loharanom-azota faladia), ny primers (2 primer 1 ADN), ary ny tenany ho buffer rafitra izay mety hitarika fanehoan-kevitra rehetra.

PCR dia ahitana dingana telo: denaturation, primer annealing sy elongation.

1. denaturation. Nandritra ny mafana ny 94-95 degre Celsius proshodit handika ny hidrôzenina fatorana eo amin'ny gadra roa ny ADN, ary vokatr'izany dia mahazo tokana roa-tafahitsoka molekiola.

2. annealed primers. Nandritra ny mafana ny 50-60 degre centigrade primers mitranga amin'ny fidirana amin'ny faran'ny-tokana tafahitsoka nucleic asidra molekiola araka ny karazana fifamenoana.

3. Elongation. Nandritra ny mafana ny 72 degre no voafintina vavy tafahitsoka avo roa heny acide asidra molekiola.

DNA sequencing

Molekiolan'ny biolojika matetika mila fomba fikarohana fahalalana ny filaharan'ireo nucleotides amin'ny môlekiola ny acide asidra. Mba hamaritana ny fototarazo fehezan-dalàna sequenced. Molekiolan'ny diagnostics ny hoavy dia miorina amin'ny fahalalana azo tao an-tapa-kevitra ny filaharana ny olombelona.

Ireto manaraka ireto karazana sequencing:

• sequencing ny Maxam-Gilbert;
• Sanger sequencing;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe sequencing.